His標(biāo)簽純化樹(shù)脂（Ni-NTA Resin）試劑,是用于純化6xHis標(biāo)簽重組蛋白的一種純化介質(zhì)，它是由4%交聯(lián)的Sepharose耦連了一種四齒螯合劑NTA而得. Ni-NTA樹(shù)脂用于在非變性或變性條件下純化任何表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的6xHis標(biāo)簽重組蛋白。NTA，含有四個(gè)螯合區(qū)，較一般的三齒螯合劑能更好的結(jié)合Ni2+。6xHis可與Ni2+螯合，從而使His標(biāo)簽蛋白結(jié)合在Ni-NTA純化介質(zhì)上，未結(jié)合的蛋白被洗滌下去，結(jié)合在介質(zhì)上的蛋白經(jīng)過(guò)一定濃度的咪唑或低PH緩沖液被溫和的洗脫下來(lái)，從而得到高純度的目的蛋白。

組分

50％的懸浮液（20％乙醇），已螯合Ni2+。

主要特征

該純化介質(zhì)與His標(biāo)簽蛋白具有高的親和力，可達(dá)5~20 mg/ml。

可在非變性和變性條件下純化任何表達(dá)系統(tǒng)所得的His標(biāo)簽蛋白。

純化程序簡(jiǎn)單，所得的蛋白純度可高達(dá)95％。

Ni-NTA Resin可再生4-6次，重復(fù)使用。

應(yīng)用

His標(biāo)簽蛋白的純化。

蛋白結(jié)構(gòu)與功能研究。

蛋白-蛋白以及蛋白-DNA之間相互作用的研究。

配體-受體之間相互作用的研究。

儲(chǔ)存

4°C保存，切勿凍存。

His標(biāo)簽純化樹(shù)脂（Ni-NTA Resin）試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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