原代細胞的生存受多種因素影響，以下是一些關(guān)鍵要點：

合適的培養(yǎng)環(huán)境

培養(yǎng)基：是為原代細胞提供營養(yǎng)和維持生存的基礎(chǔ)。不同類型的原代細胞對培養(yǎng)基的需求差異很大，如神經(jīng)細胞通常需要含有特殊生長因子和營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，以支持其生長和分化；而皮膚成纖維細胞則可以在較為通用的 DMEM 培養(yǎng)基中良好生長。

溫度：一般來說，來源于人體和哺乳動物的原代細胞最適培養(yǎng)溫度為 37℃，這與體內(nèi)環(huán)境溫度一致。溫度過高或過低都會影響細胞的代謝活動和生理功能，甚至導致細胞死亡。

氣體環(huán)境：主要是氧氣和二氧化碳。氧氣是細胞進行有氧呼吸、產(chǎn)生能量的必要條件；二氧化碳對于維持培養(yǎng)基的 pH 值穩(wěn)定至關(guān)重要。通常細胞培養(yǎng)需要在含 5% 二氧化碳的培養(yǎng)箱中進行，以保證培養(yǎng)基的 pH 值維持在 7.2-7.4 之間。

濕度：培養(yǎng)環(huán)境的濕度應保持在 95% 左右，以防止培養(yǎng)基中的水分蒸發(fā)，維持培養(yǎng)基的成分穩(wěn)定和滲透壓平衡。

細胞接種密度

原代細胞接種密度過低，細胞之間的相互作用減少，可能會影響細胞的增殖和存活；接種密度過高，細胞會過早地接觸抑制，營養(yǎng)物質(zhì)消耗過快，代謝廢物積累過多，也不利于細胞的長期生存。如肝細胞原代培養(yǎng)時，合適的接種密度可能在每平方厘米 1×10? - 5×10?個細胞。

底物和支架

許多原代細胞具有貼壁生長的特性，需要合適的底物來附著和鋪展。細胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿表面通常經(jīng)過特殊處理，以增加細胞的貼壁能力。對于一些特殊細胞，還需要使用細胞外基質(zhì)成分如膠原蛋白、纖連蛋白等進行包被，為細胞提供更接近體內(nèi)的微環(huán)境，促進細胞的附著和生長。

避免污染

無菌操作：在原代細胞培養(yǎng)的整個過程中，必須嚴格遵守無菌操作原則。實驗人員要穿戴無菌工作服、口罩、手套等，實驗器材和培養(yǎng)基等都要經(jīng)過嚴格的滅菌處理。

檢測和預防：定期對細胞培養(yǎng)物進行微生物污染檢測，包括細菌、真菌、支原體等。一旦發(fā)現(xiàn)污染，應立即采取措施，如丟棄受污染的細胞培養(yǎng)物，對培養(yǎng)環(huán)境和器材進行chedi消毒等。

生長因子和激素

許多原代細胞的生長和生存依賴于特定的生長因子和激素。如表皮生長因子（EGF）可以促進上皮細胞的增殖和分化；胰島素樣生長因子（IGF）對多種細胞的生長和代謝具有調(diào)節(jié)作用。在培養(yǎng)原代細胞時，需要根據(jù)細胞類型添加相應的生長因子和激素，以維持細胞的正常生理功能和生存。

原代細胞的生存需要在各個環(huán)節(jié)精心把控，為細胞提供最適宜的條件，才能保證細胞的正常生長和用于各種科學研究及應用。