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細(xì)胞消化的小技巧

更新時(shí)間:2024-02-23      點(diǎn)擊次數(shù):547

細(xì)胞消化的小技巧


不一定要一次把所有細(xì)胞都要消化下來!


晃動(dòng)培養(yǎng)盤并在顯微鏡下用肉眼觀察,只要70~80%細(xì)胞都收縮了或超過適合消化時(shí)間,就該終止消化反應(yīng),如果細(xì)胞量夠即可進(jìn)行后續(xù)傳代或?qū)嶒?yàn)步驟;如果細(xì)胞量不夠,則可視情況用不含鈣、鎂離子的平衡鹽溶液清洗仍貼壁的細(xì)胞,再進(jìn)行一次消化反應(yīng)。


▲ 消化不下來的細(xì)胞(黃)請(qǐng)視情況決定是否再消化一次。


不一定要吹打成W全單細(xì)胞懸液!


一般細(xì)胞脫離培養(yǎng)底物、并經(jīng)過5~10次輕柔吹打后,會(huì)在細(xì)胞懸液里形成小規(guī)模聚集(約5~10顆細(xì)胞),所以不需要過度延長消化時(shí)間想讓細(xì)胞分離成單細(xì)胞懸液。


消化效果不佳,先提升消化液濃度、再加長作用時(shí)間!


當(dāng)你選定了一種消化方式 (物理機(jī)械法除外),發(fā)現(xiàn)效果不佳,首先應(yīng)考慮提高EDTA或胰酶濃度,效果再不佳才加長消化的作用時(shí)間,避免細(xì)胞長時(shí)間浸泡在消化液中造成的細(xì)胞膜損傷。


(一般消化液使用:0.02%~0.04% EDTA作用5-20分鐘;0.2~0.5% 胰蛋白酶作用1~5分鐘)

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結(jié)語


細(xì)胞消化 ,是一個(gè)看似很簡單,但是有很多技術(shù)含量的步驟。消化好壞、是否污染、有無受傷,都在這短短的五六分鐘里決定。


當(dāng)我們已經(jīng)可以順利操作細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),接下來要思考的,就是如何讓細(xì)胞長得更健康、更均一、做出來的實(shí)驗(yàn)才會(huì)更好。


祝各位的細(xì)胞都顆顆透亮、粒粒分明、活力旺盛!


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